EN
Яагаад бодит цагт ПЦР-ийн оношлогооны цуглуулмуйн хайрцагууд вирусийн ачаалалыг хянахад чухал вэ?
Клиник худалдан авах бүлгүүдтэй ба лабораторийн мэргэжилтнүүдтэй жилдүүр ажиллахын дотор би шинжилгээний аргын сонголт нь диагностикын хайрцаг вирусын хэмжээг хянах програмын найдвартай байдлыг шууд тодорхойлдог. Эмч нь өвчтний ВИЧ юм уу гепатит C-ийн эмчилгээнд яаж хариу үзүүлж буйг хянах шаардлагатай үед, удаан юм уу нарийн бус үр дүн зөвхөн техникийн харш биш. Түүнд холбогдох шийдвэрүүдийн авах хугацаа хоцрогдож, өвчтний үр дүнгүүд нь муудаж ирдэг. Түүн дагуу реал-тайм ПЦР-д суурилсан оношлогооны цуглуулмүүд нь сүүлийн үед вирусын хэмжээг тодорхойлох шинэ үеийн үндэс болой болж ирдэг.
Энэ статт нь вирусын тоололд реал-тайм полимеразын гинжин урвал (ПЦР) технологи нь бусад илрүүлэлтийн арга замуудаас яагаад илүү үр дүнтэй бөлгөөнүүдийн техникийн болон клиник шалтгаануудыг, үнэлэхдээ ямар параметрүүдийг үлдээхгүй тавихыг, мөн здравоохраненияйн байгууллагууд нь худалдан авах шийдвэрүүдийг тодорхойлж хандаж болойг авч үздэг. молекуляр диагностикалын хайрцаг , мөн здравоохраненияйн байгууллагууд нь худалдан авах шийдвэрүүдийг тодорхойлж хандаж болойг авч үздэг.
Нарай вирусын хэмжээг хянах даалгавар
Вирусын ачаалалд хяналт тавих нь тодорхой клиник үүрэг гүйцэтгэнэ: үүнд өвчтний цус эсвэл эдийн сориндоо вирусын тоо хэмжигдэнэ, ихэвчлэн олон улсын нэгж миллилитр (IU/мл) эсвэл миллилитрт копи тоогоор илэрхийлдэг. ХИВ, гепатит C (HCV) ба цитомегаловирус (CMV) гэх мэт удаан үргэлжлэх халдварын үед вирусын ачаалалд хяналт тавих нь эмчилгээний эхлэл, тунгийн зөрчил, түүнчлэн төрөлхийн төвөгтэй бүтэц илрүүлэх үүрэг гүйцэтгэнэ.
Олон улсын нийтлэг таамаглалын арга бүхлээр харахад үндэсний асуудал нь вирусын байх, байхгүй байхыг баталж чадах бөлгөөн, гэтэд нь түүний тооцоолох нарийн тодорхойлолтыг хийхдээ хүнд бэрхшээлийн үүсгэнэ. Жишээ нь, хурдан антиген шинжилгээ нь үйлдлийн хувьд хялбар бөлгөөн, гэтэд нь вирусын концентраци болон сорилын цагт хамаарч, 59–80% хүртэлх мэдээлэл үзүүрлэх чадварыг үзүүрлэнэ. Антивирус эмчилгээний үед вирусын үржихүүн бүхлээр дарлагдаж буйг тогтоох гэж оролдож буй эмчдийн хувьд ийнхүү хувьсах хэмжээ нь зөвшөөрөгдөхгүй оношлогооны тодорхой бус байдал үүсгэнэ. Вирусын үржихүүн бүхлээр дарлагдаж буйг тогтоох гэж оролдож буй эмчдийн хувьд ийнхүү хувьсах хэмжээ нь зөвшөөрөгдөхгүй оношлогооны тодорхой бус байдал үүсгэнэ. Антибоди юм уу антиген таамаглалын үндэслэл дээр суурилан бүтээсэн халдварт өвчин шинжилгээний хайрцаг нь анхнаасаа хүртэл хүндрүүлэх хөтөлбөрт оношлогооны тооцоолох шаардлагыг хангахын тулд зохиогдож нее.
Бодит цагт ПЦР технологи нь ийнхүү асуудлыг яаж шийддэг
Бодит цагт ПЦР, бас квантификационы ПЦР (qPCR) гэж нэрлэдэг, өвчтний сорингоос тодорхой нуклейн хүчлийн дараалалыг үржүүлж, нэгэн зэрэг үржүүлэлтийн сигналыг цикл бүрт хэмжинэ. Энэ тасралтгүй хэмжилт нь хоёртүвшиннүүр (бүтэн/бүтэн биш) үр дүнд орхидог биш, харин тоон утга өгдөг, түүн дагуу вирусын ачааллыг үнэлэх үүрэгтэй.
Гайхалтай мэдэрч чадах чадвар ба тодорхойлж чадах чадвар
Вирусыг илрүүлж, тоолож тодорхойлохын тулд ПЦР-ийн арга зүйн хувьд мөнхийн өндөр мэдэрч чадах чадвар ба тодорхойлж чадах чадвар хамтран илрүүлдэг, түүн дагуу бусад ойлгогч арга зүйн хувьд ийнхүү хослолыг посийнхүү хүртэлхүүр бүтээх нь хийгүүр. Нийтлэлд опубликован үнэлгээнүүдэд амьсгалын ба цусонд дамжуулдаг вирусын зорилтот молекулд бодит цагт ПЦР-ийн тодорхойлж чадах чадвар 99%-аас дээш хүртэлхүүр бүтээж, мэдэрч чадах чадвар протокол, сорингоос хамааран өөрчлүүрдэг, гэтэд антител-дүүрэн альтернатив арга зүйн хувьд тоон утга үзүүрлүүдийн хувьд илүү үр дүнтэй.
Өндөр тодорхойлолт нь особенно бага вирусийн ачаалал бүхий нөхцөлд чухал. Хэрэв өвчтөн антиретровирусийн эмчилгээнд сайн хариу үзүүлж, вирусийн хувилбарын тоо илүү доод илрүүлэх хязгаарын ойрхин унах үед, бага тодорхойлолттой шинжилгээний худал эергүүд үүрд нь зүй ёсоор шаардагдахгүй эмчилгээний өөрчлөлтүүд хийхүүд хүргэд. диагностикын хайрцаг харин өндөр мэдрэмжтэй шинжилгээ вирусийн сэдэрлүүдийг цаг түрүүнд илрүүлд, нь эмчилгээний дутагдалд хяналт тавих үед чухал чадвар.
Нормчилсон Тоон Хэмжилт
Дэлхийн здравоохранениян байгууллага (WHO) HCV РНК-ийн анхны олон улсын стандарт (96/790), ялгаварлан 4.70 log10 IU/шилд, HIV-1 РНК-ийн анхны олон улсын стандарт (97/656), ялгаварлан 5.00 log10 IU/мл-д тогтоосон газар нь гол вирусийн зорилгоор олон улсын холбогдох хэмжүүрүүдийг баталж. Эднүүд калибровкалын тулгуур нь лабораториудын хооронд тоон харьцуулалт чухал клиник утга имээд: нэг шинжилгээний төвд гаргасан вирусийн ачаалалд үр дүн нь бүх другие шинжилгээний төвд ижил клиник утга имээд тайлбарлагдаж.
Сайн загварчлагдсан молекуляр диагностикалын хайрцаг эдүгээр ВОЗ-ын олон улсын стандартуудад тулгуурлан калибровдог, ийнхүү IU/мЛ-д илэрхийлсэн үр дүн нь бүх хэрэгсэл, лаборатори, газарзүйн бүснүүд дагуу нэгтгэлт байдаг. Дэлхийн масштабт ажиллах оспиталууд эсвэл олон газраас сэмплүүд хүлээн авдаг референс лабораториудын хувьд энэ хоорондын хамтын ажиллагаа зөвхөн хүсэлт биш, харин шаардлагатай нөхцөл.
Хурд: Эмчилгээний шийдвэр гаргахыг дэмжих
Орчин үеийн бодит цагт ПЦР платформууд нь ихэнх стандарт шинжилгээний хувьд 60–90 минутын дотор амплификаци ба илрүүлэлтийн циклүүдийг дуусгаж чаддаг. Харин соёлтой (культивацийн) эсвэл бусад нуклейн хүчлийн амплификацийн арга замууд нь 24 цаг эсвэл түүнээс илүү хугацаа шаардаж, ПЦР-ийн хурд нь клиник шийдвэр гаргахыг ижил өдөр хийх боломжийг олгодог. ЦМВ вирусын хэмжээг хянах нь үндсэн шинжилгээ бөлүүрт бүх төрлийн трансплантат хүлээн авагсадтай холбоотой иммунохүчирхүүлсэн өвчтний бүлгүүдийн хувьд хурдан үр дүн нь эмчид вирусын үржил төлөөрхийн хавдар үүсгэх хэмжээнд хүрмүүн урьдчилан эмчилгээ хийх боломж олгодог.
ПЦР-диагностик хайрцагт үнэлэх гол техникийн параметрүүд
Худалдан авах специалистуудын хувьд үнэлэх диагностикын хайрцаг вирусны ачаалалын хяналтад хэдэн техникийн параметр түүхдүүр анхаарал шаардууд.
- Илрүүлж чадах хамгийн бага түвшин (LLOD): Төхөөрөмж нь илрүүлж чадах хамгийн бага вирусны хувилах тоо. ХИВ-ын хяналтад клиник зөвлөмжүүд ихэвчлэн LLOD 20–50 хувилах/мЛ бүхий шинжилгээний арга зүйг заалд. LLOD-ын утга өндөр бүхий төхөөрөмж нь бага түвшний вирэмияг алдаж, үлдсэн вирусны идэвхийг доод талаас нь үнэлж чадахгүй.
- Динамикийн загвар: Төхөөрөмж нь нарийн хэмжилт үзүүлж чадах дүрсийн хүрээ, ихэвчлэн log10 нэгжид илэрхийлд. Өргөн динамик хүрээ нь ганц шинжилгээний арга зүйг ашиглан анхны онош (болой вирусны ачаалал) ба эмчилгээний хяналт (илрүүлж чадах хамгийн бага түвшинд ойрхон дарангуйлагдсан вирусны ачаалал) гэдгийг хамрахыг хангана.
- Насосын нэгдүүрлэл: Нас бүхий партийн хувьсах чанар нь үр дүнгийн найдвартай байдлыг цаг хугацаа дагуу нөлөөлд. Сар, жил дагуу ижил өвчтөнийг урт хугацаанд хяналтад держигсд бүхий байгууллагуудад партийн тогтвортой ажиллах чанар нь эмчилгээний хүчингүй байхын оронд реагентын хувьсах чанарын улмаас вирусны дахин өсөх гэдгийн худал дүрслэлүүдийг саатуулд.
- Даавар төрлийн нийцүүр: Вирусын хүчирхүйлт шинжилгээнд ашигладаг клиник түүврүүд нь зорилгооны патоген ба клиник заалт хамаарч, плазм, сэрүүм, бүтэн цус, тархины ус юм.
- Төхөөрөмжийн платформтой нийцэх чадвар: Бүх бодит цагт ПЦР хайрцагууд ихэвчлэн тодорхой термоклинер платформд зориулан бүтээдгүүд. Оршин буй лабораторийн төхөөрөмжүүдтэй нийцэх чадварыг баталгаажуулах нь хэрэгжүүлэх зардлыг бүүрдүүлж, параллель төхөөрөмж худалдан авахыг саатуулж.
Халдварын өвчинд хэрэглэх хүрээ
Real-Time PCR халдварын өвчний диагностикалын хайрцаг клиник хэрэглээний үр дүнд вирусын зорилгооны өргөн хүрээнд нүүрдүүлж:
- HIV-1 РНХ: Антиретровирус эмчилгээний хариу үйлдлийг хянах ба эмчилгээд төвөгтэй бүтэц өөрчлөлтийг илрүүлэх
- HCV РНХ: Шууд үйлдэлт антивирус эмчилгээ дуусгасны дараа тогтвортой вирусологийн хариу үйлдлийг баталгаажуулах
- HBV ДНХ: Антивирусийн урьдчилан саатуулах арга хэмжээ болон эмчилгээний хугацаа тодорхойлохын тулд
- CMV ДНХ: Бүтэн бүрдүүлэгчид ба гемопоэтический стволовых клеток шилжүүлэгчид дунд урьдчилан саатуулах эмчилгээг удирдах
- EBV ДНХ: Шилжүүлэгт дараа лимфопролифератив өвчинд оролцох аюулд хяналт тавих
- SARS-CoV-2 РНХ: Эрүүл мэндийн бүлгийн нөхцөлд клиник удирдлагын болон халдвар тархахыг саатуулах шийдвэрүүдийг дэмжих
Нийгмийн эрүүл мэндийн үзэгдлүүд, сүүлийн жилүүдэд тодорхой харагдаж буй бүрдүүлэгчид, вирусын илрүүлэлт болон хяналтын гуйлтад хурдан өсөлт үүсгэж чадна диагностикын хайрцаг бүтээлүүд. Хамгийн сүүлийн үед реал-тайм ПЦР платформын хувьд шалгаж баталж, нийлүүлэлтийн галереяг бүрдүүлж успайх институтууд нь онгон халдварын үед хурдан хариу үйлдэл шаардагдаж буй үед шинэ туршилтын чадалд хурдан өсөлт үүсгэх байрлалд илүү сайн бүрдүүлэгчид.
Вирусны ачаалал тодорхойлохын тулд ойрхон шинжилгээний цуглуулмайг сонгохдоо юунаа харах вэ
Худалдан авах, нийлүүлэх газрын үүднээс PCR-үндэслэн бүтээдэг ойрхон шинжилгээний цуглуулмайг сонгох шийдвэр нь зөвхөн ажиллах үзүүлэлтүүд дээр суурилж не Диагностикын хайрцаг үйлдвэрлэл стандартууд, түүнд ISO 13485 чанарын удирдлагын системд нийцэх, CE-IVD эсвэл холбогдох улсын бүртгэлтүүд гэх мэт зөвшөөрлийн шаардлагууд нь үйлдвэрлэлд хэрэглэдэг технологи нь хүлээж буй чанарын шаардлагуудад нийцдэг гэдгийг тусгаарлан баталж өгдөг.
Оношилгооны багцны багцлал давхар хилт нийлүүлэлтүүдийн хувьд анхаарах вэ. PCR реагентууд ихэвчлэн хүйтэн цэдүүрт хадгалахыг шаардаж, хүргэлтийн нөхцөлд үйлдлийн чанарыг хадгалж чадах баглаажилт нь шинжилгээний өмнөх хугацаанд чанар алдах аюулд хориг үүсгэдөг. Хүйтэн цэдүүрт логистик үйл ажиллагаа бүрэн бүтээмжтэй бүтээдэг бүснүүдийн байгууллагуудын хувьд температур өсөх нөхцөлд хадгалах тогтвортой байдал нь худалдан авах шийдвэрт онцгой ач хүндтэй шинж болой.
Нийлүүлэлтийн тасралтгүй байх нь анхны гэрээ бүртгэлтэй дараа худалдан авах бүлгүүд нь тааралдаж буй нөгөө нүдний үзүүлэлт. Түүхийн нийлүүлэлтийн тасралт, үндсэн ажиллах үед хугацаа уртасах, реагентын найрласын өөрчлөлтүүдийн урьдчилан мэдээлэлгүй хийгдэх нь олон дахин бүртгэлтүүдийн үзүүлэлт. Нийлүүлэлтийн нөхцөлүүдийг тодорхой тогтоох, найрласын өөрчлөлтүүдийн урьдчилан мэдээлэл өгөх шаардлагууд, нөөц нийлүүлэлтийн хуримтлуудын зохион бүтээл нь бүрдүүлэлтүүдийн тасралтгүй шинжилгээний хөтөлбөрүүдийг хадгалахад тусалмуй.
Дүгнэлт
Бодит цагт ПЦР-ийн оношлогооны цуглуулга нь вирусын хэмжээг хянахад онцгой чухал, учир нь түүн дээр бусад одоогийн илрүүлэх арга замуудын аль нь ч масштабт үзүүрлэх неегүй: вирусын нуклейн хүчлийг нарийн, стандартизирован хэмжих боломжийг өгдөг, мөн клиник шийдвэр гаргахад хангалттай магадлалын түвшин ба сонгомжлолын түвшинтэй. Клиник нөхцөл нь ХИВ-ийн эмчилгээний хяналт, гепатит С-ийн зовиургүйдүүлэх үр дүнг үнэлэх юм уу трансплантацийн иммуносупрессив удирдлага бүхнүүд нь найдвартай вирусын хэмжээг тодорхойлох техник шаардлагуудыг ижил үндсэн чадварууд дээр нийлүүлдөг, түүн дээр сайн зохион бүтээсэн молекулар оношлогооны цуглуулга нь тааруулж бүтээдөг.
Сүүлд нь үзүүрлэх зүйлсийн үүрэгт бүхнүүд нь здравоохранениян байгууллагууд, өвчний газрууд ба худалдан авах мэдлэгтнүүд диагностикын хайрцаг худалдан авах, баталж бүтээсэн үзүүрлэх үр дүнг, партийн тогтвортой баримт бичиг, зөвшөөрөл, нийлүүлэлтийн найдвартай бүтэцтүүдийн түвшинийг үлдээх нь техник худалдан авах шийдвэрээс тогтвортой клиник хөрөнгө бүтээдөг.
